基于艾德曼（Edman）的N端测序是一种广泛应用于蛋白质研究的序列解析技术，主要用于测定蛋白质或多肽的N端氨基酸序列。基于艾德曼（Edman）的N端测序依赖于化学降解，通过逐步切割N端氨基酸并鉴定其组成，实现序列测定。由于其高精确度和可靠性，基于艾德曼（Edman）的N端测序在蛋白质组学、结构生物学和生物医药研究中具有重要价值。本文将详细介绍基于艾德曼（Edman）的N端测序的基本原理和关键实验步骤。

一、基于艾德曼（Edman）的N端测序原理

Edman法的核心是苯异硫氰酸（PITC）与蛋白质N端游离氨基的特异性反应。在碱性条件下，PITC与N端氨基结合生成苯硫脲（PTC）衍生物；随后通过温和酸解使PTC-氨基酸环化，释放异硫氰酸酰基（ATZ）氨基酸，剩余肽链保留完整以供后续循环测序。ATZ氨基酸进一步转化为稳定的苯硫酰氨基酸（PTH），通过色谱技术（如HPLC）鉴定其类型。整个反应需严格调控温度、溶剂及pH，以确保高效性与重复性。若N端被修饰（如乙酰化或焦谷氨酰化，一种封闭性修饰），需预先去封闭处理以恢复游离氨基。

二、基于艾德曼（Edman）的N端测序实验步骤

1、样品制备

（1）蛋白或多肽纯化：确保样品纯度，以避免杂质干扰测序过程。通常采用高效液相色谱（HPLC）或凝胶过滤进行纯化。

（2）去除缓冲盐和其他污染物：减少背景干扰，提高PITC反应效率。需使用透析或超滤去除高盐环境。

（3）确保N端游离：若N端被修饰（如乙酰化），需进行化学或酶解处理，以恢复游离状态。

（4）检测蛋白浓度：确保样品浓度适宜，避免信号噪声干扰或引发副反应。

2、PITC衍生化

（1）PITC与N端氨基酸反应，形成PTC-氨基酸衍生物。

（2）反应需在碱性环境中进行，以确保衍生化高效。

（3）优化反应条件，确保试剂与蛋白N端高效结合，提高测序灵敏度。

（4）避免水分影响，基于艾德曼（Edman）的N端测序需要PITC衍生化在无水环境中进行，以防止溶剂抑制反应。

3、酸解脱落N端残基

（1）通过温和酸解，使PTC-氨基酸环化，释放ATZ氨基酸。

（2）保留剩余多肽链，用于后续循环测序。

（3）控制酸解条件，避免过度降解或副反应干扰。

（4）优化酸解时间，确保N端氨基酸的完全释放，同时不影响多肽主链的稳定性。

4、PTH氨基酸分析

（1）将ATZ氨基酸转化为PTH氨基酸，以增强稳定性。

（2）通过高效液相色谱（HPLC）或毛细管电泳检测，鉴定释放的氨基酸。

（3）确保数据准确，避免背景噪声干扰测序结果。

（4）选择合适的检测波长，通常采用UV-Vis或荧光检测，以增强信号灵敏度。

5、反应循环

（1）重复上述步骤，逐步测定N端序列。

（2）一般可测定20–30个氨基酸，测序精度受限于蛋白长度及纯度。

（3）优化循环次数，根据样品性质调整测序策略，提高效率。

（4）采用自动化测序系统，减少人为误差，提高重复性。

基于艾德曼（Edman）的N端测序是解析蛋白质N端氨基酸序列的经典方法，依靠化学降解逐步释放N端残基，实现高精确度的序列测定。该技术在蛋白质研究、质量控制等领域具有应用价值。通过优化样品制备、衍生化条件及检测方法，可提高测序的准确性和稳定性，确保蛋白质研究的可靠性。百泰派克生物科技提供精准的基于艾德曼（Edman）的N端测序服务，助力科研人员解析蛋白结构、验证序列完整性，并推动生物医药领域的创新发展。我们致力于为客户提供高质量的数据支持，帮助解决蛋白质表征中的关键挑战。

百泰派克生物科技特色项目

一、蛋白测序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪及岛津公司埃德曼降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于埃德曼降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。

※服务优势：

1.采用目前世界上先进的质谱仪器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可实现对所测定靶蛋白序列 100% 的覆盖;

3.可测定蛋白N端多达 70个氨基酸序列;

4.可测定多种形式的样品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白条带;

5.样品用量低: 蛋白样品仅需 5-10ug，即可完成检测;

6.测序不受N端封闭，PEC和和糖基化等N端修饰的影响。

二、蛋白质组学

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos质谱平台结合Nano-LC，提供定量蛋白质组学、靶向蛋白质组学、多肽组学、翻译后修饰蛋白组学等多种蛋白质组学分析服务。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白质组学服务，助力微量样本蛋白组学、大样本群医学及高通量修饰组学等研究工作。

※服务优势：

1 .高通量定量蛋白分析:多对照组大规模实验分析，发现新的生物标记物;

2.体内体外多种蛋白质标记方法，适用于分析组织、细胞、血液等多种样品;

3.质谱分析灵敏度高，实验结果重复度高;

4.可检测较低丰度蛋白，线性范围广;

5.专业生物信息学分析，分析更系统准确。

三、单细胞质谱流式技术分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm质谱流式系统进行单细胞质谱流式技术分析，采用金属元素标记物（通常是金属元素标记的特异抗体）标记细胞表面和内部的分子，然后用流式细胞原理分离单个细胞，再用电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）分析单个细胞的原子质量谱，最后将原子质量谱数据转换为细胞表面和内部的信号分子表达量。

※服务优势：

1.技术先进，填补技术空白

采用金属标记抗体技术，避免了传统流式荧光通道少且易相互影响的问题。可在单细胞层面上对多种指标同时进行表征，百泰派克生物科技可做到同时检测51个目标蛋白。

2.分析数量大，成本较低

单细胞RNAseq受成本等因素限制，所有样本细胞汇总的分析数目一般在2x10^4个左右，而流式质谱技术一次（单样本）就可分析至少10^5的细胞，实现了数量级的提高，且成本不高于单细胞RNAseq。

3.应用前景大

①流式质谱结果可以给出细胞亚群的变化，在临床诊断、疾病机制研究等方面具有极大的研究前景；

②将金属标签技术与其他技术结合会有新应用方向。除常规蛋白外，质谱流式细胞技术还可用于蛋白翻译后修饰；

③可检测细胞存活率、细胞大小、mRNA转录子表达量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现

百泰派克生物科技的基于高精度质谱的免疫多肽组学分析及新抗原发现一站式解决方案包括我们专有的、高度敏感的免疫肽富集和鉴定方案。我们能够帮助您实现10,000个以上I型多肽和10,000个以上II型多肽的鉴定和识别。通过我们优化的高通量免疫多肽组学分析平台进行免疫肽组学分析，可从最小的样品材料中进行可重复的识别和定量。该服务可以应用于大规模的研究，旨在助力科研工作者寻找癌症、免疫疾病及传染病的解决方案，深入挖掘未知的靶标。

五、生物药物表征

百泰派克基于高分辨率质谱技术，MALDI TOF，高效色谱分离技术，提供一系列完善的生物药物分析方案，从蛋白质、多肽、抗体、疫苗等生物制品的氨基酸组成和一级结构分析，到产品变异性和纯度分析。旨在提供优质生物药物分析服务，帮助生物医药生产商提高生物药物品质。

百泰派克生物科技七大检测平台

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于为生物/制药和医疗器械行业提供质量控制检测和项目验证等专业服务。公司实验室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法规和指导原则，通过CNAS/ISO9001双重质量体系认证，建立了完备的质量体系，数据冷热/异地备份，设备定期计量/期间核查，软件审计追踪，为客户提供一体化解决方案和技术服务，支持新药研发、药物申报注册和生产放行。

1.公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；

2.获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；

3.业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；

4.七大质量控制检测平台，满足您一站式服务需求；

5.服务3000+企业，10000+客户的选择；

6.致力于为您提供优质的生物质谱分析服务!

>>点击了解更多优质服务项目